人乳腺癌細(xì)胞

　　人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231介紹

　　該細(xì)胞系由CailleauR在1976年從一名48歲的患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的白人女性的心包滲出液中分離建立的。該細(xì)胞表達(dá)FGF的受體。

　　細(xì)胞特性

　　（1）來源：乳腺癌

　　（2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

　　（3）含量：>1x106個(gè)/mL

　　（4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

　　（5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231運(yùn)輸和保存

　　可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

　　（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

　　（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

　　（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

　　MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞/STR鑒定用途：僅供科研使用。

　　細(xì)胞接受后的處理：

　　（1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

　　（2）在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給細(xì)胞拍照各2-3張（10×，20×都要拍照），作為售后的依據(jù)。

　　（3）觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

　　（4）貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

　　（5）懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

　　（6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后di一次傳代建議1：2傳代。

　　細(xì)胞培養(yǎng)步驟

　　一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

　　（1）準(zhǔn)備L15（推薦iCell-0009）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

　　（2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，100%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　（3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　二．細(xì)胞處理：

　　（1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　（2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

　　1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　3、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　4、將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

　　（3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

　　下面T25瓶為類；

　　1、細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

　　2、4min1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

　　3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

　　鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

　　一、原代細(xì)胞服務(wù)：

　　各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源

　　多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源

　　原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等

　　原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

　　二、細(xì)胞系服務(wù)：

　　細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書

　　細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)

　　細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等

　　三、iPS細(xì)胞服務(wù)：

　　iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）

　　iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存

　　iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)

　　新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估

　　四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等

　　鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司

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